Purification et caractérisation partielle de la fraction 5 extraite d'un déchet biologique << Liquide Hydatique >>

Abstract

L'hydatidose est une maladie parasitaire due au développement chez l'homme et les herbivores d’une larve remplie d'un liquide « liquide hydatique ». Ce dernier qui est un déchet biologique constitue une bonne source d'antigènes parasitaires à usage diagnostique. Dans le présent travail, l'antigène 5, reconnu comme étant la fraction majeure et la plus immunogène de ce liquide hydatique a été purifié partiellement par précipitation au sulfate d'ammonium à 70% puis caractérisé par les méthodes physicochimiques et immunologiques. La séparation chromatographique du liquide hydatique humain par gel filtration a permis de visualiser quatre pics dont le troisième est caractéristique de l'antigène 5. Ce dernier a montré une mobilité électrophorétique typique de l'antigène 5 par immunoélectrophorèse en donnant un seul arc de précipitation vis-à-vis d'un pool de sérum de malades et celui du lapin immunisé par cet antigène. Une bande approximative de 66KDa a été révélée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en milieu dénaturant (SDS-PAGE) et dans des conditions non réductrices. Le radiomarquage de cet antigène à l'iode125 a donné un rendement satisfaisant de l'ordre de 63%. L’évaluation de l'antigène marqué a permis de déterminer une pureté radiochimique de 92.6% et une activité spécifique de 11.7 μCi/μg .L'étude de l'intégrité antigénique utilisant la technique de radioimmunodosage (RIA) a donné une liaison non spécifique de 16% et un pourcentage de fixation vis-à-vis du sérum de lapin anti fraction 5 de l'ordre de 63%. L'immunoréactivité testé avec les sérums de malades atteints par cette maladie a révélé une faible liaison spécifique comparée à celle obtenu avec l'antisérum de lapin. Ces résultats préliminaires relatifs à la purification et au marquage à l’iode -125 sont promoteurs et susceptibles d'être sans doute largement améliorés dans le futur