Abstract:
L’objectif de ce travail est d’étudier la cinétique d’oxydation du phénol par la tyrosinase (EC: 1.14.18.1) libre et immobilisée dans du gel d’alginate de calcium.
La tyrosinase est extraite à partir du champignon Paris (Agaricus bisporus), et son activité enzymatique est mesurée par spectrophotométrie à 400 nm en présence du phénol comme substrat.
L’enzyme libre est relativement stable pendant 20 jours de stockage à -15°C.
Une étude des différents paramètres opératoires sur les cinétiques d’oxydation du phénol par les deux systèmes enzymatiques a été faite.
La constante de Michaelis-Menten (Km) pour l’enzyme immobilisée (1,3 mM) est environ deux fois plus élevée par rapport à celle de l’enzyme libre (0,6 mM).
Par contre, la vitesse maximale (Vmax) est 30-fois moins élevée.
Le pH et la température optimaux sont déplacés de 7,6 à 5, 6 et de 45 à 550C, pour la tyrosinase libre et la tyrosinase immobilisée, respectivement.
L’enzyme immobilisée semble être plus thermostable et son activité est maximale pour des billes d’alginate d’un diamètre de 3,4 mm.
Ce document comporte trois chapitres:
Le premier présente une étude des principales données bibliographiques concernant le phénol dans l’environnement, ainsi que quelques éléments relatifs aux traitements, surtout enzymatique.
Une brève étude bibliographique sur la tyrosinase, et les techniques d’immobilisation des enzymes.
Une étude théorique sur les techniques d’immobilisation par inclusion sur un support d’alginate de calcium, et une étude sur les cinétiques enzymatiques.
Le second chapitre abordera l’ensemble du matériel et des méthodes utilisés pour l’extraction de la tyrosinase, et la caractérisation de la tyrosinase libre et immobilisée.
Dans le dernier chapitre, nous exposons et discuterons l’ensemble des résultats expérimentaux relatifs aux cinétiques de l’oxydation réalisés dans les différentes conditions opératoires.
