Abstract:
L’objectif visé dans cette étude est l’extraction, la purification et la caractérisation de la chitinase en vue de son utilisation pour hydrolyser la matière chitineuse.
La production d’une chitinase brute à partir des abats de poissons: Rascasse rouge Scorpaena scrofa ainsi que son utilisation dans des conditions opératoires ont été atteintes.
L’extrait enzymatique a été purifié par précipitation au sulfate d’ammonium (10%-85%) suivi d’un fractionnement par chromatographie d’exclusion moléculaire et échangeuse anionique.
Ces techniques de purification jusqu’à l’homogénéité ont permis d’atteindre une activité spécifique d’environ 6.51U/mg avec un facteur de purification de 162.75.
L’analyse par électrophorèse SDS-PAGE sur gel polacylamide et spectrométrie de masse (MALDI-TOF/MS) a montré que cette chitinase est un monomère avec une masse moléculaire de 50.103 KDa.
Les 25 résidus N-terminaux de l’enzyme montrent une homologie avec la famille 18 des chitinases.
Les paramètres optimums de température et de pH de la chitinase purifiée sont respectivement de 80°C et pH 5. L’enzyme reste stable sur une gamme de pH allant de 3 à 7 pour un temps d’incubation de 4heures.
L’enzyme est stable dans une gamme de température allant de 70 à 90°C pendant 48heures d’incubation.
Au-delà, elle perd presque toute son activité à 100°C.
L‘activité de la chitinase est stimulée par COSO4 et complètement inhibée par Hg2+ et Hg+.
D’après nos résultats, nous constatons que notre enzyme obéit à une cinétique Michaelienne et les valeurs de Km et Kcat étaient de 0.412 mg et 5.33 S-1. In vivo, le test de bio insecticide de cette enzyme a été effectué contre l’insecte adulte et larve Callosobruchus maculatus ravageur des denrées stockées.
L’enzyme a montré significativement une activité insecticide à l’égard de cet insecte, indiquant la possibilité de l’utiliser dans les stratégies biotechnologiques pour la gestion de ces ravageurs.
